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大鼠半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)ELISA试剂盒说明书

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浏览:次 2017-05-16 11:15:20

大鼠半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)ELISA试剂盒说明书 大鼠半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)ELISA试剂盒说明书    实验原理:  本试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中大鼠半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)水平。用纯化的大鼠半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次加入半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶),再与HRP标记的半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)浓度。  试剂盒组成: 试剂盒组成 48孔配置96孔配置保存  说明书1份1份  封板膜2片(48)2片(9

   实验原理:

  本试剂盒利用双抗体夹心卧式插拔寿命实验机法测定标本中大鼠半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)水平。用纯化的大鼠半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次加入半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶),再与多功能蠕变材料实验机HRP标记的半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)呈正橡胶材料拉伸实验机相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠半胱氨酸蛋白酶⑶(caspase⑶)浓度。

  试剂盒组成:导向曲折实验机 试剂盒组成 48孔配置96孔配置保存

  说明书1份1份

  封板膜2片(48)2片(96)

  密封袋1个1个

  酶标包被板1×481×962⑻℃保存

  标准品:18U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2⑻℃保存

  标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2⑻℃保存

  酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2⑻℃保存

  样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2⑻℃保存

  显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2⑻℃保存

  显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2⑻℃保存

  终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2⑻℃保存

  浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2⑻℃保存

  样本处理及要求:

  1.血清:室温防护服接缝强力实验机血液自然凝固10⑵0分钟,离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清,保存进程中如出现沉淀,应再次离心。

  2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10⑵0分钟后,离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清,保存进程中如有沉淀构成,应当再次离心。

  3.尿液:用无菌管搜集,离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清,保存进程中如有沉淀构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

  4.细胞培养上清:检测分泌性的成分时,用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清。检测细胞内的成分时,用PBS(PH7.2⑺.4)稀释细胞悬液,细胞浓度到达100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清。保存进程中如有沉淀构成,应再次离心。

  5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入1定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本熔化后依然保持2⑻℃的温度。加入1定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000⑶000转/分)。仔细搜集上清。分装后1份待检测,其余冷冻备用。

  操作步骤

  1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第1、外水压实验机第2孔中分别加标准品100μl,然开关寿命实验机后在第1、第2孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第1孔、第2孔中各取100μl分别加到第3孔和第4孔,再在第3、第4孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第3孔和第4孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第5、第6孔中,再在第5、第6孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第5、第6孔中各取50μl分别加到第7、第8孔中,再在第7、第8孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第7、第8孔中分别取50μl加到第9、第10孔中,再在第9第10孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第9第10孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为12U/L高压爆破实验机,8胶管脉冲实验机U/L,4U/L,2U/L,1U/L)。

  2. 加样:分别设空白孔(空白对比孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽可能不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

  5. 洗涤:谨慎揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重HE178喷气式实验机复5次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7. 温育:操作同3。

  8. 洗涤:操作同5。

  9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

  10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟之内进行。

  注意事项:

  1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平欧标缩水率实验机衡15⑶0分钟后方可以使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3. 各步加样均应使用加样器,并常常校订其准确性,以免实验误差。1次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物资含量太高(样本OD值大于标准品孔第1孔的OD值),请先用样品稀释液稀释1定倍高品质汽车零部件实验机数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n&铝箔胶带拉力实验机times;5)。

  5. 封板膜只限1次性使用,以免交叉污染。

  6. 底物请避光保存。

  7. 严格依照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按沾染物处理。

  9. 本试剂不同批号组分不得混用。

me600c万能实验机  10. 如与英文说明书有异,以ROSS耐折实验机英文说明书为准。

  计算:

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在座标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

  试剂盒性能:

  1.样品线性回归与预期浓度相干系数R值为0.95以上。

  2.批内与批见应分别小于9%和11%

  检测范围:

  0.5U/L – 16U/L

  保存条件及有效期:

  1.试剂盒保存:;2⑻℃。

  2.有效期:6个月

大鼠半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)ELISA试剂盒说明书
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