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脂溶性维生素的测定

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浏览:次 2017-05-16 11:13:56

脂溶性维生素的测定 脂溶性维生素的测定   1、维生素A  目前维生素A都是合成的,来源:(1)从动物肝脏中得到;(2)从维生素前体而得到(维生素前体:主要指类胡萝卜素,主要是β-胡萝卜素)  维生素A的测定经常使用的方法有3氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。  对3氯化锑比色法适用于样品中含VA高的样品,方法简便、快速、结果准确,但是对维生素A含量低的样品,如每克样品中含5~10μg维生素A时,这时候样品由于受其脂溶性物资的干扰,不利用比色法测定。  对紫外分光光度法没必要加显色剂显色,可直接测定维生素A的含量,对样品中含VA低的也能够测出可信结果,操作简便、快速。  1、维生素A的性质  ⑴因有许多不饱和链,故见光易分解;  ⑵在缺氧情况下,对热较稳定,对光特别敏感。如测强化奶粉时,速度要快,1般要求测定时间长

  1、维生素A

  目前维生素A都是合成的,来源:(1)从动物肝脏中得到;(2)从维生素前体而得到(维生素前体:主要指类胡萝卜素,主要是β-胡萝卜素)

  维生素A的测定经常使用的方法有3氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。

  对3氯化锑比色法适用于样品中含VA高的样品,方法简便、快速、结果准确,但是对维生素A含量低的样品,如每克样品中含5~10μg维生素A时,这时候样品由于受其脂溶性物资的干扰,万能拉压实验机不利用比色法测定。

  对紫外分光光度法没必要加显色剂显色,可直接测定维生素A的含量,对样品中含VA低的也能够测出可信结果,操作简便、快速。

  1、维生素A的性质

  ⑴因有许多不饱和链,故见光易分解;

  ⑵在缺氧情况下,对热较稳定,对光特别敏感。如测强化奶粉时,速度要快,1般要求测定时间长短,由于时间长,见光时间长,见光分解,故测出的比出厂的含量要少;

  ⑶对碱稳定;

  2、测定步骤

  ⑴样品用有机溶剂萃取脂类

  样品可以根据脂肪的测定处理脂肪,即索氏抽提法,采取乙醚作提取剂,也可用热苯回流方法提取脂类。如果样品中含蛋白质和淀粉多的情况下可采取乙醚提取法。

  ⑵脂类的皂化

  脂类有维生素和脂肪这两部份通过皂化(50%KOH、无水C2H3OH、热回流)把它们分开,得到1部份皂化物和1部份不皂化物。

  皂化条件:

  (1)C2H3OH︰脂类 = 8︰1;

  (2)KOH量= 脂量×皂化价(mg)×2.5;

  (3)皂化温度与时间:70℃、30分钟

  在皂化时可以加入抗氧剂连苯2酚和对苯2酚,避免氧化。

  ⑶提取:不皂化物和皂化物经水、苯、**萃取可得到不皂化物。

  ⑷柱层析分离干扰物资

  采取柱层耐折实验机析分离干扰物资,如果柱层析把β-胡萝卜素也洗脱下来,那末这时候维生素A与β-胡萝卜素就是1个混合物,还要将它们分离开。如果样品中只有维生素A而不含β-胡萝卜素时,这时候可直接定容。

  维生素A与β-胡萝卜素分离:

  吸附剂: 8分中性Al2O3和2分碱性Al2O3混合,装柱

  分离方法:a. 用2%丙酮石油醚洗β-胡萝卜素;

  b. 用乙醚洗VA。

  3、万能金属拉力实验机测定方法

  ⑴ SbCl3比色法

  维生素A/CHCl3 + SbCl3/CHCl3→构成兰色物资→在620nm有最大吸光峰

  这类兰色物资不稳定,很快退色或变成其它物资,所以在分析时最好在暗室中进行,并且做标准曲线。

  计算:每百克样品含VA的量= C×(V1/V2)×(100/W)

  C :从标准曲线上查得VA的量

  V1 : CHCl3定容的量

  V2 :测定所取样液体积

  ⑵紫外分光光度法

  a. 原理:

  VA为脂溶性的,测定VA时必须高低温湿热交变实验机先将样品中的脂肪抽提出来进行皂化,萃拉力实验机取不皂化部份,在经柱

  层析除去杂质等干扰物资,在紫外328nm下测定,求出含量。

  b. 方法

  1)提取及皂化

  称样10.00g &ra微机伺服沥青混合料万能实验机rr;于烧杯中→加40ml水搅匀&rarr轮胎水压爆破实验机;移250ml分液漏斗中→加氨水5ml →加乙醇35ml →摇匀→用乙醚抽提(每次40ml抽提3次)→搜集**层→用10ml水洗**层3次→水层再用30ml乙醚抽提1次→合并所用乙醚→用索氏法除**→待瓶中乙醚除尽后→加30ml80%的KOH → 40mlC2H5OH →加0.8g焦性没食子酸→ 83℃水浴30分钟(皂化脂肪)→冷却后移入 250ml分液漏斗中→加60ml水→用40ml乙醚抽提3次→合并**抽提液→用水洗至中性→用索氏法除**→除去后用5ml石油醚单翼跌落实验机溶解瓶中高低温型拉力实验机内容物→然后移入刻度试管中

  2)层析

  在层析柱内装8cm高度中性氧化铝→ 2cm高度碱性氧化铝及1cm无水硫酸钠→以石油醚渗透→装皂化后的样液渐渐于柱内→用1~2ml石油醚洗试管→洗液倒入柱内,活塞打开以每分钟为35滴左右的速度打开,当液面降到接近硫酸钠时→加5ml石油醚→随后用5ml洗脱液逐次洗涤。

  层析柱上第1个黄色层析层,1般是β-胡萝卜素,此带在12%洗脱液前后洗去,搜集于10ml容量瓶中直到流出物不呈黄色为止,此层可测β-胡萝卜素用,而VA1般在50%洗脱液洗出,用2ml刻度吸管搜集1ml。吸约0.2ml于小试管中→加0.3ml25%3氯化锑→溶液如呈兰色→表明有VAKL零跌落实验机A存在,故0.5ml用石油醚定容10ml。

  3)样液测定

  以石油醚为空白

玻璃瓶耐内压数显式电子万能实验机力实验机  4)计算

  VA(I.μ100G)=(E×106×2)/(1830×100×W)×(1000/0.3伺服电脑纸箱抗压强度实验机)

  0.3 :每0.3μgVA相当于1I.μ

  E :消光值 W :样品重量(g)

  1830 :石油醚中其消光值1%cm为1830

  (I.μ):1个国际单位,维生素A相当于0.6 μgβ-胡萝卜素。

  4、试剂

  ⑴ 50%KOH;⑵无水硫酸钠;⑶ **(不含过氧化氢);⑷ 石油醚;⑸ 苯;

  ⑹ 45%C2H5OH(应不含醛类物资)

  酒精中含醛类的检查方法:

  首先配银氨溶液,在50%硝酸银溶液中加入浓氨水,直到氧化银沉淀又重新溶解为止,在小试管中加2ml银氨溶液,加3~5滴酒精,摇匀,加10%NaOH 1滴加热,若有银镜反应,表示乙醇中含有醛。

  脱醛处理:

  取乙醇2000ml →加AgNO32g →振摇溶解→加NaOH 4g →振摇溶解→过滤→上清液→蒸馏→便可

  ⑺ 20~25%SbCl3的CHCl3

  先量取100mlCHCl3于广口瓶中,用减差法称取1定量的干燥SbCl3,SbCl3易吸水,所以必须蒸馏重结晶后使用,1般用沙浴上加热。

  2、维生素d

  维生素D在鱼肝油和鸡蛋黄等食品中含量较多,1般成人不会缺VD,而婴儿容易缺少。

  1、操作步骤

  ⑴提取

  样品(奶粉)+水→混匀 在NH4OH的作用下酪蛋白Ca盐溶解加入乙醇使脂肪球分离→**、石油醚萃获得到脂质(其它样品可用索氏提获得到脂质)

  ⑵皂化

  在奶粉中脂溶性物资有VD、β-胡萝卜素、VA、VE、甾醇、脂肪。

  目前皂化有3种情况:

低温(室温) 中温(70℃±2℃) 高温(100℃15min) 低碱 低碱 可程式高低温交变湿热实验机 低碱 回收率不完全 回收率46% 回收率70% 电子数显弹簧拉压实验机

  低碱 =脂肪︰KOH连接器插拔实验机为1︰2.5的关系

  另外在皂化时加抗氧化剂与不加抗氧化剂回收率不1样,加抗氧化剂的回收率高于不加抗氧化剂的回收率。

  有人将上面的皂化条件互补,采取中温-高碱并加抗氧化剂,这样的回收率为96.8%,效果较好。

  故皂化条件:70℃±2℃高碱+ 抗氧化剂

  ⑶萃取

  ⑷除甾醇

  甾醇在食品中含量较多,主要是通过柱子,这个柱子就是毛地黄屏显冲击实验机皂甙。

泡沫材料实验机

  甾醇 + 毛地黄皂甙→沉淀

  洗脱液用乙醚︰己烷 = 1︰5配制而成

  甾醇︰毛地黄皂甙 = 1︰14 用量

  ⑸皂土柱层析

  当VD与VA共存时,须用皂土柱层析除VA及VA的分解产物。

  测定方法有两种:

  比色法:

  维生素A/CHCl3 + SbCl3/CHCl3/乙酰氮→构成橙黄色物资→ 500nm下测定

  紫外分光光度法

  VD/乙醇→265 nm下测定

脂溶性维生素的测定
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