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流式细胞仪样品分选原理

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浏览:次 2017-05-25 10:04:07

流式细胞仪样品分选原理 流式细胞仪样品分选原理   流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的。总的进程是:由喷嘴射出的液柱被分割成1连串的小水滴,根据选定的某个参数由逻辑电路判明是不是将被分选,而后由充电电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而产生偏转,落入搜集器中;其它液体被当作废液抽吸掉,某些类型的仪器也有采取捕获管来进行分选的。  稳定的小液滴是由活动室上的压电晶体在几10KHz的电信号作用下产生振动而迫使液流均匀断裂而构成的。1般液滴间距约距约数百μm。实验经验公式f=v/4.5d给出构成稳定水滴的振荡信号频率。其中v是液流速度,d为喷孔直径。由此可知使用不同孔径的喷孔及改变液流速度,可能会改变分选效果。使分选的含细胞液滴在静电场中的偏转是由充电电路和偏转板共同完成的。充电电压1般选+150V,或⑴50V;偏转板间的电位差为数千伏

  流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的。总的进程是:由喷嘴射出的液柱被分割成1连串的小水滴,根据选定的某个参数由逻辑电路判明是不是将被分选,而后由充电线弯折实验电机电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而产生偏转,落入搜集器中;其它液体被当作废液抽吸掉,某些类型的仪器也有采取捕获管来进行分选的。

  稳定的小液滴是由活动室上的压电晶体在几10KHz的电信号作用下产生振动而迫使液流均匀断塑料水平垂直燃烧实验机裂而构成的。1般液滴间距约距约数百μm。实验经验akron耐摩擦实验机公式f=v/4.5d给出构成稳定水滴的振荡信号频率。其中v是液流速度,d为喷孔直径。由此可知使用不同孔径的喷孔及改变液流速度,铅笔硬度耐摩擦实验臭氧老化实验机机可能会改变分选效果。使分选的含细胞液滴在静电场中的偏转是由充电电路和偏转板共同完成的。充电电压1般选+150V,或⑴50V;偏转板间的电位差为数千伏。充电电路中的充电脉冲产生器是由逻辑电路控制的,因此从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要1段延迟时间,1般为数10ms。精确测定延迟时间是决定分选质量的关键,仪器多采取移位寄存器数字电路来产生延迟。可根据具体要求予以适当调剂。

  (50)数据处理原理:FCM的数据处理主要包括数据的显示和分析,至于对仪器给出的结果如何说明则随所要解决的具体问题而定。

  ①数据显示:步入式实验机FCM的数据显示方式包括单参数直方图、2维点图、2维等高图、假3维图和列表模式等。

  直方图是1维数据用作最多的图形显示情势,既可用于定性分析,又可用于定量分析,形同1般X—Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同,坐标可以是线性标度或对数标度,用“道数”来表示,实质上是所测的荧光或散射光的强度。坐标1般表示的是细胞的相对数。图10⑵给出的电子式摆锤冲击实验机是直方图情势。只能显示1个参数与细胞tye2000d数显压力实验机之间的关系是它的局限性。

  2维点图能够显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系。坐标和坐标分别为与细胞有关的两个独立参数,平面上每个点表示同时具有相应坐标植的细胞存在(图10⑶)。可以由2维点图得到两个1维直方图,但是由于吞并现象存在电池包挤压针刺实验机,2维点图的信息量要大于2个1维直方图的信息量。所谓吞并就是说多个细胞具有相同的2维坐标在图上只表现为1个点,这样对纸箱耐破实验机细胞点密集的地方就难于显示它的精细结构。

  

  

  图10⑵ 直方图 图10⑶ 2维点图

  2维等高图类似于地图上的等高线表示法。它是为了克服2维点图的不足而设置的显示方法。等高紫外光老化实验机图上每条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数,即“等高”。曲线层次越高所代表的细胞数愈多。1般层次所表示的细胞数间隔是相等的,因此等高线越密集则表示变化率越大,等高线越疏则表示变化平衡。图10⑷给出了2维等高图的样式。

  假3维图是利用计算机技术对2维等高图的1种视觉直观的表现方法。它把原2维图中的隐坐标—细胞数同时显现,但参橡胶曲折实验机数维图可以通过旋转、倾斜等操作,以便多方位的视察“山峰”和“谷地”的结构和细节 ,这无疑是有助于对数据进行分析的。图10⑸为假3维图的示意图。

  

原位实验机

  

  图10⑷ 2维等高图 图10⑸ 假3维图

  列表模式其实只是多参数数据文件的1种计算机存贮方式,3个以上的参数数据显示是用多个直方数显单翼跌落实验机图、2维图和假3维图来完成的。可用ListMode中的特殊技术,开窗或用游标调出相干部份再改变维数进行显示。例如,“1调2”就是在1维图上调出2维图来;&铜板拉力实验机ldquo;2调1”就是从2维图中调出1维图来。图10⑹给出了从2维图等高图中调出相应窗口的直方图的示意图。

  

  图10⑹ 从2维图设窗调出直方图示意

  上面扼要地先容了几种数据显示情势,在实际利用中,可根据需防水材料实验机要选择匹配,以便了解和取得尽量多的有用信息。

  ②数据分析:数据分析的方法总的可分为参数方法和非参数方法两大类。当被检焊点强度实验机测的生物学系统能够用某种数学模型技术时则多使用参数方法。数学模型可以是1个方程或方程组,方程的参数产生所需要的信息来自所测的数据。例如在测定老鼠全自动按键实验机精子的DNA含量时,可以获得细胞频数的尖锐波形散布。如果采取正态散布函数来描写这些数据,则参数即为面积、平均值和标准偏差。方程的数据拟合则通常使用最小2乘法。而非参数分析法对丈量得到的散布形状不需要做任何假定,即采取无设定参数分析法。分析程序可以很简单,只需要直观观测频数散布;也可能很复杂,要对两个或多个直方图逐道地进行比较。

  逐点描图(或用手工,或用描图仪、计算机系统)是大家经常使用的印花牢度水洗实验机数据分析的重ross鞋底耐折实验机要手段。大家常可以钢板曲折实验机用来了电脑式万能材料实验机解数据的特性、寻觅那些不曾预感的特异征象、选择统计分析的模型、显示终究结果等。事实上,不经过先对数据进行直观视察分析就决不应当对这批数据进行数值分析。从这1点来看,非参数分析是参数分析的基础。

  逐道比较工作量较大,但用直观法很容易发现明显的差异,特别是对比组和测试组。斟酌到FCM的可靠性,要注意到对每组丈量,都要有对比组,对比组可以是空白对比组、阴性对比组、或零时刻对比组等,具体设置应根据整体实验要求而定。对比组和测试组的逐道比较常常可以减少量多没必要要的误差和毛病说明。顺便指出,进行比较时对曲线的总细胞数进行归1化处理,乃至对两条曲线逐道相减而得到“差结果曲线”常常是适合的。

  由于数据分析常常和结果说明关系10分密切,也就是说和生物学背景相干曲挠实验机,因此具体的分析法和原理将在后面结合实例再先容。

流式细胞仪样品分选原理
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